基因組范圍的CRISPR 敲除（GeCKO）文庫能夠在人細胞中快速產生功能缺失的突變體并且篩選所期望的表型。GeCKO文庫是gRNA的混合文庫，可以在人基因組內敲除任何表達基因及非表達的基因，如miRNA基因。改進后的GeCKO v2.0文庫含有非靶向gRNA作為對照，與此同時用來轉導的慢病毒載體也同步進行了升級，以便更高效的富集病毒和提升病毒在原代細胞的轉染效率。GeCKO文庫已經被廣泛使用于原代細胞，干細胞，癌細胞及各種穩定細胞系。 GeCKO文庫允許客戶在不同的條件下鑒定任何細胞功能必須的基因，篩選哪個基因的缺失使癌細胞具有耐藥性。要獲取更多GeCKO文庫設計、構建信息，請參考張峰實驗室發表的文獻。1Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells. Ophir Shalem et al. Science 343, 84 (2014); DOI: 10.1126/science.1247005.2 Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening   Julia Joung et al. Nature Protocols, 828, 12 (2017); DOI:10.1038/nprot.2017.016.

 GeCKO v2.0文庫使用all-in-one的lentiCRISPR v2慢病毒載體，其具有比原來的lentiCRISPR載體高10倍的病毒滴度。GeCKO文庫一共靶向19050個基因，一共含有123,411個質粒。針對人類基因組的每個基因，該文庫的設計包含：6條單鏈gRNA（sgRNA）以及針對每個miRNA的4條sgRNA，及1000條非靶向性的對照sgRNAs。這些gRNA分布在每個基因超過3-4個組成型表達的外顯子上，以此將脫靶效應降至很低。其中骨架質粒結構如下：

pLentiCRISPR v2質粒圖譜

如何使用GeCKO文庫

GeCKO文庫是CRISPR gRNA的混合文庫，可以在人的基因組內敲除任何基因及非表達的基因。每條gRNA克隆到優化過的慢病毒載體中以實現高效率地轉染原代細胞或培養細胞。GeCKO文庫應以較低的MOI值轉導細胞，以保證每個細胞進入不超過1條gRNA。在CRISPR/Cas9正向篩選中，可以用來篩選哪些基因的敲除引起細胞對藥物、毒素、病原體等產生耐受性。要獲取關于GeCKO文庫篩選更多應用，請參考 Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening. Julia Joung et al. Nature Protocols, 828, 12 (2017);DOI:10.1038/nprot.2017.016

CRISPR/Cas9 基因組編輯相關服務

1> CRISPR gRNA質粒構建服務;  2> CRISPR基因組編輯服務