質粒菌株產品操作說明書

一、擴增流程

收到產品后，請先根據產品管壁標簽來判斷產品形式，并在擴增前準確查找該質粒菌株的抗性、感受態和培養溫度。

（一）干粉質粒

產品規格：0.5～2μg質粒干粉，保證能轉化出來，不保證具體含量，請務必先轉化進感受態，再挑單菌落提取后再使用。

保質期限：90天，請盡快轉化。

保存溫度：一般在-20°C，置于-80°C保存時間更長。

運輸方式：常溫運輸，1周內。

注意事項：轉化前請準確查找該質粒相應的抗性、抗性濃度、感受態名稱和培養溫度。

使用說明：

1、收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl無菌水溶解質粒，室溫放置1min；

2、從-80°C冰箱中取出相應的感受態，置于冰盒上解凍，并做好標記；

3、取2μl質粒加至100μl感受態中，冰浴30min;

4、42°C熱激90s，再冰浴2min;

5、加入900μl無抗的LB液體培養基，180rpm震蕩培養45min;

6、6000rpm離心5min，僅留100μl上清混勻菌體沉淀；

7、混勻后的菌液加至對應抗性的LB平板上，倒入適量玻璃珠，涂勻液體；

8、將平板正向培養1h，再倒置培養12h～16h;

9、挑取單克隆菌落至對應抗性的LB液體培養基中，震蕩培養12h~16h，根據實驗需要提取質粒。

注意：如果第二天轉化平板長的過多，請將質粒按比例稀釋后再轉化。

（二）甘油菌種（冰袋運輸，存于-80℃，保質期90天）

產品規格：甘油菌種。

保質期限：90天。

保存溫度：-80℃。

運輸方式：冰袋運輸，1周內。

注意事項：培養前請準確查找該菌種的抗性、抗性濃度和培養溫度。

使用說明：

1、收到甘油菌種后請甩動保存管，讓菌液不要吸附在管壁上；

2、用接種環在固體平板上四區劃線，如有抗性就加對應抗性；

3、恒溫培養箱倒置培養12~16h；

4、挑取單菌落接種于液體培養基中，如有抗性就加對應抗性；

5、搖床震蕩培養12~16h，根據實驗需要保存甘油菌。

（三）穿刺菌種（冰袋運輸，存于4℃，保質期7天）

穿刺接種，液體培養后四區劃線，再挑單菌落液體培養。

（四）菌落平板（冰袋運輸，存于4℃，保質期7天）

直接挑取單菌落至液體培養基中。

（五）液體質粒（冰袋運輸，存于-20℃，保質期90天）

強烈推薦委托我們大提，單獨提取的液體質粒收到后可直接使用。

（六）濾紙質粒（常溫運輸，存于-20度，保質期90天，請務必先轉化提質粒后使用） 收到貨后將濾紙畫圈部分剪下放入EP管中，加100ul無菌水將濾紙浸濕并浸泡5min，吸取5ul質粒轉化，離心全涂。

                                   常用抗生素推薦濃度