CRISPR/Cas9作用原理
根據Cas蛋白質和參與序列的不同，將目前發現的CRISPR/Cas系統分為Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。其中，Ⅰ型和Ⅲ型需要多種Cas蛋白共同發揮作用，而Ⅱ型由Cas9單獨參與，是研究較為深入的一種類型。在pre-crRNA轉錄的同時，與其重復序列互補的反式激活crRNA（trans-activating crRNA，tracrRNA）也轉錄出來。Cas9首先與crRNA和tracrRNA結合形成復合物，此復合物通過與PAM序列結合并侵入DNA，形成RNA-蛋白-DNA復合結構，進而在與crRNA配對的序列靶點剪切雙鏈DNA。通過人工設計這兩種RNA，可以改造形成具有引導作用的sgRNA（single guide RNA），通過將表達sgRNA的元件與表達Cas9的元件相連接，得到可以同時表達兩者的質粒，便能夠對目的基因進行操作，以引導Cas9對DNA的定點切割。
CRISPR/Cas9系統的作用原理
人HEK293細胞NDFIP1基因敲除
通過CRISPR/Cas9基因編輯技術敲除HEK293細胞的NDFIP1基因。篩選后挑單克隆，并通過PCR及測序檢測以及Western Blot驗證，成功獲得NDFIP1基因敲除的純合細胞。細胞檢測結果：無菌、無支原體。培養體系：DMEM+ 10% FBS；1:3傳代。