免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation，Co-IP)技術是以抗原、抗體間的特異性免疫反應為基礎，研究蛋白質間相互作用的經典方法。與其它研究蛋白質相互作用的方法相比，免疫共沉淀是在生理條件下檢測蛋白質間相互作用，因此，不僅可以檢測到體內形成的天然復合體，而且可排除過表達靶蛋白所帶來的假陽性；由于內源性的靶蛋白是完全加工、修飾成熟的蛋白質，因此，依賴于修飾的蛋白質間相互作用也可以被檢測到。

實驗原理      

免疫共沉淀技術原理是以細胞內源性靶蛋白(protein X)為誘餌，將protein X的抗體與細胞總蛋白進行共孵育，促進免疫復合物的形成；隨后加入能夠與抗體Fc段結合的protein A/G(預先結合固化在瓊脂糖微珠上)，這樣在protein X所在的環境中與其有相互作用的蛋白(protein Y)會被一起沉淀下來，形成"結合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗體-protein A/G微珠"復合物，純化該復合物后凝膠電泳分離蛋白，應用Western blot 或者質譜技術鑒定靶蛋白的結合蛋白。

服務流程

服務承諾：

1. (2)根據總蛋白定量的結果，微調各個樣本間濃度差異，高溫變性，加入loading buffer，上樣跑膠，以及轉膜顯色等步驟。
2. (3)利用軟件對所得膠片進行掃描，用相對定量方法進行定量分析時，要對管家蛋白等參比蛋白進行同樣操作，用所得到的值進行蛋白量的校正，(4)最后求得目的蛋白的相對表達量。
3. (5)提供實驗報告：包括詳細的實驗方法及western blot結果的相關圖表。
4. (6)本公司保證檢測結果準確、客觀、可信，但不能確保一定要得到某特定結果。

客戶提供:

1. (1)客戶須在實驗開始前確保其細胞或組織中有目的蛋白的表達，并提供目的蛋白的相關信息（蛋白名稱、大小等信息），盡可能詳細的背景資料，包括蛋白的種屬、大小、參考文獻等。
2. (2)誘餌蛋白及目的蛋白的表達質粒，需測序驗證，提供測序峰圖文件。
3. (3)如無需轉染或轉化的，則需提供含有誘餌蛋白及目標蛋白的裂解液5mL以上，如果為原核表達，則需要求蛋白務必為上清表達。
4. (4)客戶應對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經濟損失由客戶承擔。
5. (5)如需使用誘餌蛋白及目標蛋白的特異性抗體檢測，則需提供至少20ul以上特異性抗體。依據實驗設計提供對應的誘餌Western blot實驗結果及免疫共沉淀WB結果。保留原始的實驗曝光膠片以及免疫共沉淀實驗報告。
6. (6)新鮮樣品（組織為100-150 mg/樣，細胞>10^7個/樣），若為凍存樣品，請于-70 ℃以下保存并自備液氮以便運輸。一抗，標明來源和稀釋度，也可讓我司代買。
7. (7)Co-IP所需要的目的蛋白的一抗，可自行提供，或在本公司購買相應指標。

結果展示：

                                                                                               利用免疫共沉淀檢測細胞內源蛋白X與蛋白Y的相互作用。

常見問題及可能原因